Przeprowadzono próbę doboru stężenia składników podłoża sacharozowego w celu otrzymania cytrynianu i inwertazy z wykorzystaniem szczepu Y. lipolytica A-101-B56-5. Skład podłóż zaprojektowano w programie Design Expert 8. Hodowle w poszczególnych podłożach przeprowadzono systemem stacjonarnym w aparacie Bioscreen C. Najlepszy plon biomasy (OD420-580nm = 1,9) uzyskano w podłożu z dużą ilością ekstraktudrożdżowego, najwyższą aktywność inwertazy zewnątrzkomórkowej (63,9 U/l) w podłożu o najwyższym stężeniu sacharozy, natomiast najwyższe stężenie cytrynianu (0,288 g/l) w podłożu o niskim stężeniu zarówno chlorku amonu, jak i ekstraktu drożdżowego (najwyższy stosunek węgla do azotu – C:N). Wykonane badania nie pozwoliły na wybór wspólnego podłoża do jednoczesnej biosyntezy wszystkich produktów, jednakże wskazały optymalne składy podłóż, które mogą być zastosowane w procesie biosyntezy wyżej wymienionych związków w hodowlach bioreaktorowych z wykorzystaniem szczepu Y. lipolytica A-101-B56-5 i sacharozy jako taniego substratu.
EN
Influence of media components concentration was carried out for the evaluation of biosynthesis of citrate and invertase by Y. lipolytica strain A-101-B56-5 from sucrose as a cheap substrate. The concentration of components was designed in the Design Expert 8 software. All experiments were performer as batch cultures using microtiter plates in Bioscreen C apparatus. Amoung 37 media of different composition (1) the highest amount of biomass (OD420-580 nm = 1.9) was obtained in the medium with high amount of yeast extract, (2) the highest extracellular invertase activity (63.9 U/l) in the medium with the highest sucrose concentration, (3) the highest concentration of citrate (0.288 g/l) in medium where low concentration of both ammonium chloride and yeast extract were used (the highest carbon to nitrogen ratio - C/N). No common medium was selected for simultaneous biosynthesis of all analyzed products. However, the optimum compositions of media for separate processes were obtained and may be used during biosynthesis of the compounds of interest in the bioreactor cultures using Y. lipolytica A-101-B56-5 strain and sucrose as a cheap substrate.
W prezentowanej pracy postanowiono ustalić, które gatunki drożdży zasiedlają domowe fermentowane produkty: kiszone ogórki, kiszoną kapustę oraz kiszone mieszane warzywa. Z wybranych do badań kiszonek wyizolowano 75 szczepów drożdży, które identyfikowano na podstawie o testu API (bioMerieux), amplifikacji wybranych regionów genów rDNA (NS3-ITS4) i analizy restrykcyjnej oraz skanowania genomu w poszukiwaniu sekwencji mikrosatelitarnych. Za dominującą mikroflorę wszystkich kiszonych produktów uznano drożdże Saccharomyces cerevisiae (38,7% izolatów) i Yarrowia lipolytica (25,6% izolatów). Z kiszonych produktów wyizolowano także szczepy należące do następujących gatunków: Pichia etchellsii, P. ohmerii, Candida holmii, C. pelliculosa i Shizosaccharomy- cesjaponicus. Wykorzystując API 32C, niektóre izolaty zidentyfikowano tylko do rodzaju, a z uwagi na ubogie bazy danych szczepów wzorcowych nie wszystkie izolaty udało się jednoznacznie zidentyfikować na poziomie gatunku technikami molekularnymi. Wyniki badań pozwoliły na rozbudowanie tworzonej bazy danych o nowe szczepy drożdży (szczepy o odmiennych profilach restrykcyjnych), co w przyszłości powinno ułatwić prowadzenie prac identyfikacyjnych.
EN
This research aims at determining which yeast types can be encountered in the following home products: pickled cucumbers, sauerkraut and mixed pickled vegetables. Seventy-five strains of yeast have been isolated from the pickles selected for the research. These strains have been identified on the basis of API tests (bioMerieux), amplification of the selected regions of rDNA genes (NS3-ITS4) and restrictive analysis, as well as genome scanning, performed in order to detect microsatellite sequences. Yeast Saccharomyces cer- evisiae (38.7% isolates) and Yarrowia lipolytica (25.6% isolates) have been determined as a dominant microflora for the pickles. There have been also isolated strains belonging to the following types: Pichia etchellsii, P. ohmerii, Candida holmii, C. pelliculosa and Shizo- saccharomyces japonicus. With the use of API 32C, some isolates have been identified merely in accordance to their type, and due to a limited data base of model strains, not all the isolates have been possible to be classified on the level on their type with the support of molecular techniques. The obtained results of the research allowed to supply the database with new yeast strains (strains of different restrictive profiles), which should consequently facilitate conducting the identifying works.
Podano wyniki analiz mikrobiologicznych i chemicznych próbek gruntu zanieczyszczonego olejem kreozotowym na terenie zakładu przetwórstwa drewna. Wybrany teren zakładu o powierzchni ok. 0,12 ha poddano bioremediacji metodą in situ z wykorzystaniem autochtonicznych drożdży Yarrowia lipolytica do bioaugmentacji gruntu. Zastosowano trzy preparaty drożdży - komórki immobilizowane w alginianie sodu i skrobi oraz zawiesiny komórek. Do badanego gruntu wprowadzono około 2*10[do potęgi 12] komórek drożdży (238 g). Na pod-stawie uzyskanych wyników jednoznacznie wykazano poprawę struktury gruntu i zmniejszenie zawartości występujących na tym terenie zanieczyszczeń. Sumaryczna zawartość wielo-pierścieniowych węglowodorów aromatycznych zmniejszyła się 3-krotnie podczas 9 miesięcy bioremediacji. Znacząco wzrosła jedynie zawartość antracenu. Zanieczyszczenie olejem kreozotowym, mierzone jako suma węglowodorów ropopochodnych (TPH), zmniejszyło się o prawie 70% na terenie, gdzie wprowadzono drożdże unieruchomione (immobilizowane) w alginianie sodu oraz o ponad 33% na całym badanym obszarze. Wprowadzenie unieruchomionej biomasy drożdży Y. lipolytica wzbogaciło eukariotyczną mikroflorę gleby, poprawiając stosunek liczby bakterii do liczby drożdży i pleśni. Z gruntu poddanego procesowi oczyszczania, obok szczepów gatunku Y. lipolytica, wyizolowano i zidentyfikowano także drożdże Rhodotorula glutinis oraz Cryptococcus albidus.
EN
Creosote-contaminated soil samples collected within the premises of a timber processing plant were made the subject to microbiological and chemical analysis. An area of approximately 0.12 ha was chosen for in-situ bioremediation involving an autochthonous Yarrowia lipolytica yeast species. Use was made of three yeast preparations: cells immo-bilized in sodium alginate or starch, and yeast suspensions. The number of yeast cells introduced into the soil approached 2*10 12 (238 g). The results obtained have revealed substantial improvement in the soil structure and noticeable reduction in the concentrations of the particular contaminants detected in this area. During nine months of bioremediation, the total content of polycyclic aromatic hydrocarbons decreased threefold, but a significant increase was observed in the concentration of anthracene. Contamination with creosote oil, expressed as the level of total petroleum hydrocarbons, was reduced by about 70% in the area treated with sodium-alginate-immobilized yeasts, and by more than 33% over the entire area examined. The introduction of immobilized Y. lipolytica biomass enriched the eukariotic microflora of the soil, improving the proportion of bacterial counts to the counts of yeasts and those of mould. Apart from the strains of Y. lipolytica, another two yeast species were isolated from and identified in the soil being bioremediated - Rhodotorula glutinis and Cryptococcus albidus.
Drożdże Yarrowia lipolytica posiadają zdolność do wzrostu na substratach tłuszczowych, n-alkanach oraz niektórych cukrach, jak glukoza, fruktoza czy mannoza. Nie posiadają zdolności do wzrostu na sacharozie – głównym sacharydzie melasy buraczanej. W pracy wykorzystano transformanty Y. lipolytica z inwertazą z drożdży Saccharomyces cerevisiae do produkcji kwasu cytrynowego z melasy w bioreaktorowych hodowlach okresowych. Szczep A18M produkował 21,8 g/L kwasu cytrynowego z wydajnością 0,48 g/g i objętościową szybkością produkcji 0,8 g/L/h.
EN
Yarrowia lipolytica reveal the ability to grow on fats or paraffins and they metabolize a few sugars, ie. glucose, fructose and mannose. They do not have the ability to hydrolyze sucrose – a main component of molasses. In this work Y. lipolytica transformants with cloned invertase from yeast Saccharomyces cerevisiae were used for efficient production of citric acid from molasses in bioreactor batch cultures. The A18M strain produced 21.8 g/L of citric acid with the yield 0.48 g/g and productivity of 0.8 g/L/h.
Na drodze mutagenezy indukowanej promieniowaniem UV uzyskano 24 mutanty w szczepie Yarrowia lipolytica Wratislavia K1. Selekcja na podstawie analizy wzrostu na podłożu YNB z erytrytolem wskazała 9 szczepów, których powierzchnia kolonii była zbliżona do powierzchni kolonii szczepu wyjściowego. W 7-dobowych hodowlach wstrząsarkowych, w podłożach z glicerolem, drożdże produkowały od 10,3 do 16,6 gdm-3 erytrytolu oraz od 11,5 do 17,9 gdm-3 mannitolu. Do hodowli bioreaktorowych wybrano szczep K1-UV20 oraz K1-UV21. Najwyższe stężenie erytrytolu uzyskano przy wykorzystaniu glicerolu odpadowego oraz z dodatkiem NaCl, z udziałem szczepu K1-UV21, który produkował 78,7 gdm-3 tego związku z wydajnością 0,49 g-g" i z szybkością objętościową produkcji równą 0,68 gdm-3h-1. Badania podobieństwa filogenetycznego, z wykorzystaniem metody RAPD-PCR, wykazały wysokie podobieństwo mutanta Wratislavia K1-UV21 z wyjściowymi szczepami Y. lipolytica.
EN
Twenty-four mutants in strain Yarrowia lipolytica Wratislavia K1 were obtained after mutagenesis induced by UV irradiation. The selection, on the basis of the growth ability on YNB medium containing erythritol, indicated nine strains with the size of colony surface similar to parent strain. In the 7-day shake-flasks experiment, in glycerol media, yeast produced from 10.3 to 16.6 gdm-3 of erythritol and from 11.5 to 17.9 gdm-3 of manni- tol. For further studies in bioreactor cultures strains K1-UV20 and K1-UV21 were chosen. The highest concentration of erythritol was obtained by strain K1-UV21 on crude glycerol medium, where 78.7 gdm-3 of erythritol was produced corresponding to 0.49 g-g4 yield and 0.68 gdm"3h-1 volumetric productivity. The analysis of philogenetic similarity of based on RAPD-PCR method showed high similarity of the mutant strain Wratislavia K1-UV21 to parental strains of Y. lipolytica.
JavaScript jest wyłączony w Twojej przeglądarce internetowej. Włącz go, a następnie odśwież stronę, aby móc w pełni z niej korzystać.