Wyniki wyszukiwania - BazTech

1

Hydroliza enzymatyczna wiązania peptydowego z oporami dyfuzyjnymi

Niesobska A., Trusek-Hołownia A.

Inżynieria i Aparatura Chemiczna

|

2015

|

Nr 4

186--188

PL

Przedmiotem badań była reakcja sprzęgania wybranej cząsteczki modelowej H-D-Tyr-OMe z nośnikiem stałym CM Sepharose. Reakcje prowadzono w buforach do aktywacji i sprzęgania różniących się odczynem pH w celu znalezienia warunków sprzyjających efektywnej immobilizacji. Następnie prowadzono hydrolizę utworzonego wiązania Ugand (aminokwas) - nośnik z wykorzystaniem różnych enzymów proteolitycznych (termolizyna, proteaza z B. licheniformis (subtylizyna), α-chymotrypsyna, proteaza z Rhizopus sp.). Sprawdzano także przebieg hydrolizy peptydów immobilizowanych na nośniku stałym. Badania wykazały potrzebę ustalenia warunków dla procesów sprzęgania i hyrolizy, w tym uwzględnienie oporów sferycznych w dostępie enzymu do substratu, celem uzyskania jak najwyższej wydajności.

EN

The object of the study was the coupling reaction of the selected molecule model HD-Tyr-OMe CM Sepharose solid support. The reactions were carried out in buffers for activation and coupling in a different pH value to find favorable conditions for the effective immobilization. Then, the hydrolysis of formed ligand (amino acid) - the carrier was carried out using different proteolytic enzymes (thermolysin, protease from B. licheniformis (subtilisin), α-chymotrypsin, protease from Rhizopus sp.). Also the hydrolysis of peptide immobilized on a solid support was checked. The research showed the need to optimize conditions for the formation of ligand -carrier bond and followed by the enzymatic hydrolysis, including the spherical access resistance of enzyme to substrate in order to obtain the best efficiency.

2

Enzymatyczna hydroliza kwasu hialuronowego

Niesobska A., Trusek-Hołownia A.

Inżynieria i Aparatura Chemiczna

|

2015

|

Nr 4

184--185

PL

W pracy badano i opisano wykorzystanie enzymu hydrolitycznego hialuronidazy do degradacji hialuronianu (HA) w postaci natywnej i immobilizowanej na membranie warstwy. Z przeprowadzonych eksperymentów wynika, że możliwa jest hydroliza HA prowadzona w pH dalekim od optymalnego dla działania enzymu. Uzyskane wartości stopnia hydrolizy wskazują na utrudnienia w dostępie enzymu do immobilizowanego substratu, co będzie przedmiotem dalszych badań.

EN

Use of hyaluronidase hydrolytic enzyme for degradation of hyaluronan in a native form and immobilized as a layer on the flat membrane is described in the paper. The conducted experiments show that the HA hydrolysis occurs at pH far from optimal for the enzyme activity. The calculated degrees of hydrolysis indicate the hindered enzyme access to substrate. This issue will be a subject of further research.

3

Dobór metod analitycznych do monitorowania procesu enzymatycznej hydrolizy białek

Labus K., Niesobska A., Trusek-Hołownia A.

Inżynieria i Aparatura Chemiczna

|

2015

|

Nr 4

170--171

PL

W ramach badań sprawdzono efektywność spektrofotometrycznej metody OPA, wysokosprawnej chromatografii cieczowej typu SE-HPLC oraz klasycznej filtracji żelowej do monitorowania procesu enzymatycznej hydrolizy białekk na przykładzie albuminy serum. Wyniki wskazują, że metoda OPA umożliwia szybkie wstępne oszacowanie postępu proteolizy, SE-HPLC jest niezbędna do ilościowej analizy produktów hydrolizy różniących się masą cząsteczkową, a klasyczna filtracja żelowa umożliwia rozdział mieszaniny poreakcyjnej z wyodrębnieniem frakcji zawierającej produkty o pożądanym zakresie mas cząsteczkowych.

EN

In this study the effectiveness of spectrophotometric OPA method, size exclusion HPLC (SE-HPLC) and classic gel filtration were examined in case of monitoring the enzymatic hydrolysis of proteins. Research was performed on the example of serum albumin. The results indicate that OPA method enables the preliminary estimation of proteolysis progress in a short time period. The SE-HPLC is essential for the quantitative analysis of hydrolysis products with different molecular weight. In turn, gel filtration allows the separation of hydrolysate into fractions with desired range of molecular weights.