Wyniki wyszukiwania - BazTech

1

Immunochromatografia: przegląd i charakterystyka immunosorbentów oraz metod immobilizacji

Jaszczołt M., Boczkaj G., Grygoryshyn K., Kamiński M.

Camera Separatoria

|

2011

|

Vol. 3, No. 1

69--85

PL

Chromatografia immunopowinowactwa (ang. ImmunoAffinity Chromatography, IAC) jest techniką rozdzielania stosowanń do różnorodnych klas zwiąków chemicznych, a także jako dodatkowe narzędzie w badaniach z zakresu biochemii. Kluczowym elementem odpowiedzialnym za wysoce selektywne oddziaływania w IAC jest przeciwciało (ang. antibody, Ab) produkowane przez organizmy żywe w wyniku odpowiedzi immunologicznej i wykazujące specyficzność oraz powinowactwo wobec substancji rozpoznawanych, jako obce, określanych jako antygeny. W celu przeprowadzenia procesu immunochromatograficznego przeciwciała immobilizuje się na nożnikach, które wcześniej muszą zostać zaktywowane. Jako matryce stosuje się naturalne oraz syntetyczne polimery: agarozę, celulozę, dekstran, poliakrylamidy, polimetakrylaty, a także żel krzemionkowy oraz szkło porowate. Aktywacja złóż ma za zadanie przygotować matrycę do immobilizacji poprzez wprowadzenie grup funkcyjnych oddziałujących z elementami przeciwciała. W tym celu stosuje się różnorodne aktywatory rozpuszczalne oraz sieciujące czynniki bifunkcyjne. Istnieje także szeroki wachlarz dostępnych metod ukierunkowane i nieukierunkowane (losowe). W trakcie przygotowania immunosorbentu należy uwzględnić właściwości matrycy, a także warunki prowadzenia procesu aktywacji oraz immobilizacji, co bezpośrednio wpływa na sprawność kolumny wypełnionej tego typu złożem, a w konsekwencji na efektywnoś procesu chromatograficznego.

EN

Immunoaffinity Chromatography (IAC) is a technique used for separation of different classes of chemical compounds, as well as an additional tool in biochemistry. The key element in the IAC is an antibody (Ab) produced by living organisms as a result of activation of the immune response, which shows the specificity and affinity with the substances recognized as foreign, known as antigens. In order to carry out the immunochromatographic process, antibodies are immobilized on the carrier, which must be firstly activated. There are carriers made of natural and synthetic polymers: agarose, cellulose, dextran, polyacrylamides, polimethacrylates, as well as silica gel and porous glass. The main task of activation is to prepare the carrierx for the immobilization by the introduction of functional groups interacting with the elements of the antibody. For this purpose, the various activators like soluble and bifunctional crosslinking agents are used. There are many methods of immobilization, which, depending on the antibody-matrix interactions, are divided into physical and chemical immobilization, and depending on the orientation - random and site-directed. During the preparation of immunosorbent one should take into account the characteristics of the matrix, as well as the conditions of the activation and immobilization, which directly affect the efficiency of the bed, and consequently the performance of the chromatographic process.

2

Wieloparametryczna cytometria przepływowa jako nowa technika w ręku diagnosty laboratoryjnego. Część I

Sędek Ł., Mazur B.

Laboratorium - Przegląd Ogólnopolski

|

2007

|

nr 3

45--48

PL

Cytometria przepływowa to wysoce specjalistyczna metoda analityczna, umożliwiająca jednoczesny pomiar wielu biochemicznych i biofizycznych, właściwości zawieszonych w cieczy komórek i/lub ich składowych. Technika opiera się na zastosowaniu przeciwciał monoklonalnych sprzężonych z barwnikami fluorescencyjnymi. Pomiar cytometryczny polega na analizie światła rozproszonego przez komórki oraz fluorescencji emitowanej na skutek wzbudzenia barwników. Informuje on o ich wielkości, wewnętrznej złożoności (ziarnistości) oraz ich składzie antygenowym. W skład cytometru przepływowego wchodzi układ ciśnieniowo-cieczowy, optyczny ze źródłem światła (laserem) oraz elektroniczny. Cytometry wyposażone są w przynajmniej jeden laser, emitujący światło o określonej długości fali. Liczba laserów determinuje maksymalną liczbę barwników fluorescencyjnych, jakie mogą być jednocześnie użyte. Podstawą przeprowadzenia adekwatnych pomiarów jest prawidłowa kalibracja aparatu oraz staranna kontrola jakości jego pracy.

EN

Flow cytometry is a highly specific analytical technique enabling simultaneous measurement of many biochemical and biophysical properties of cells or their fragments. The technique is based on application of monoclonal antibodies conjugated with fluorescent dyes. Flow cytometric assay relies on analysis of tight scattered on the cells as well as fluerescences emitted by excited dyes. This gives an idea about cell size, their internal complexity and antigen expression. Flow cytometers consist of three main systems: fluidics, optics with light source (laser) and electrincs. Flow cytometers are equipped in at least one laser emmiting light of particular wave lenght. The number of lasers determines the maximum number of fluorescent dyes to be used at the same time. The key to obtain adequate results is proper calibration and conscientious quality control.

3

Wielometryczna cytometria przepływowa jako nowa technika w ręku diagnosty laboratoryjnego - cz. II

Sędek Ł., Mazur B.

Laboratorium - Przegląd Ogólnopolski

|

2007

|

nr 4

40--46

PL

Próbka materiału poddawanego pomiarowi cytometrycznemu musi być odpowiednio przygotowana, w sposób zależny od jej rodzaju oraz od charakteru barwionych antygenów. W prawidłowo przeprowadzonym badaniu nie powinno brakować kontroli, zarówno negatywnej, jak i pozytywnej. Z analizy wyniku można uzyskać jakościowe i ilościowe informacje na temat populacji komórek i ekspresji antygenów. Parametry te są wysoce informatywne w wielu dziedzinach, takich jak hematologia, immunologia, diagnostyka medyczna, a także biofizyka, biochemia czy biologia komórki. Szybki rozwój cytometrii przepływowej w ostatnich latach i rozszerzenie wachlarza jej zastosowania są konsekwencją odkrywania nowych antygenów, barwników fluorescencyjnych i przeciwciał monoklonalnych oraz unowocześniania samych cytometrów.

EN

Flow cytometric assay requires appropriate material preparation, depending on the type of the sample and stained antigens. To determine the level of non-specific antibody binding an additional isotype control sample must be included. Flow cytometric assay produces qualitative data on cell populations and atigen expression, which is highly informative in many fields of science such as hematology, immunology, medical diagnostics, biophysics, biochemistry and cell biology. Rapid development of flow cytometry in recent time, and broadening of its appliacations are a consequence of continuous and successful chase of new antigens, fluorescent dyes, monoclonal antibodies, as well as implementation of modern technologies in fow cytometers

4

Nowa era przeciwciał monoklonalnych

Bednarek I.

Laboratorium - Przegląd Ogólnopolski

|

2006

|

nr 8-9

63--64

PL

Od czasu opracowania techniki fucji komórek tworzenie hybrydom produkujących przeciwciała monoklonalne stało się podstawowym źródłem syntezy wysocespecyficznych cząsteczek immunoglobulin, skierowanych przeciwko wybranemu antygenowi. Przeciwciała monoklonalne wprowadzono zarówno do badań podstawowych, diagnostyki, jak i terapii. Zastosowanie przeciwciał monoklonalnych w terapii wymusiło opracowanie bardziej wyszukanych metod syntezy - zadaniem stało się otrzymanie przeciwciał nie tylko specyficznych, ale maksymalnie zbliżonych strukturą do przeciwciał ludzkich. Tak powstały przeciwciała chimeryczne czy humanizowane, otrzymywane drogą inżynierii genetycznej.

EN

Starting from the day, when cell fusions technique was established, hybridoma cells producing monoclonal antibodies became main source of highly specific immunoglobulin directed against chosen antigen. Recently monoclonal antibodies are introduced into research area, diagnostic and therapy as well. Application of monoclonal antibodies into therapy demands approaching much more sophisicated methods of immunoglobulin synthesis. The aim is synthesis of monoclonal antibodies not only highly specific, but also structurally the closest to the structure of human antibodies. That is how using genetic engineering methods chimeric and humanized monoclonal antibodies were synthesized.

5

Izotopy astatu w medycynie

Pruszyński M., Bilewicz A.

Postępy Techniki Jądrowej

|

2003

|

Vol. 46, z. 4

22--26