Wyniki wyszukiwania - BazTech

1

Immunochromatografia: przegląd i charakterystyka immunosorbentów oraz metod immobilizacji

Jaszczołt M., Boczkaj G., Grygoryshyn K., Kamiński M.

Camera Separatoria

|

2011

|

Vol. 3, No. 1

69--85

PL

Chromatografia immunopowinowactwa (ang. ImmunoAffinity Chromatography, IAC) jest techniką rozdzielania stosowanń do różnorodnych klas zwiąków chemicznych, a także jako dodatkowe narzędzie w badaniach z zakresu biochemii. Kluczowym elementem odpowiedzialnym za wysoce selektywne oddziaływania w IAC jest przeciwciało (ang. antibody, Ab) produkowane przez organizmy żywe w wyniku odpowiedzi immunologicznej i wykazujące specyficzność oraz powinowactwo wobec substancji rozpoznawanych, jako obce, określanych jako antygeny. W celu przeprowadzenia procesu immunochromatograficznego przeciwciała immobilizuje się na nożnikach, które wcześniej muszą zostać zaktywowane. Jako matryce stosuje się naturalne oraz syntetyczne polimery: agarozę, celulozę, dekstran, poliakrylamidy, polimetakrylaty, a także żel krzemionkowy oraz szkło porowate. Aktywacja złóż ma za zadanie przygotować matrycę do immobilizacji poprzez wprowadzenie grup funkcyjnych oddziałujących z elementami przeciwciała. W tym celu stosuje się różnorodne aktywatory rozpuszczalne oraz sieciujące czynniki bifunkcyjne. Istnieje także szeroki wachlarz dostępnych metod ukierunkowane i nieukierunkowane (losowe). W trakcie przygotowania immunosorbentu należy uwzględnić właściwości matrycy, a także warunki prowadzenia procesu aktywacji oraz immobilizacji, co bezpośrednio wpływa na sprawność kolumny wypełnionej tego typu złożem, a w konsekwencji na efektywnoś procesu chromatograficznego.

EN

Immunoaffinity Chromatography (IAC) is a technique used for separation of different classes of chemical compounds, as well as an additional tool in biochemistry. The key element in the IAC is an antibody (Ab) produced by living organisms as a result of activation of the immune response, which shows the specificity and affinity with the substances recognized as foreign, known as antigens. In order to carry out the immunochromatographic process, antibodies are immobilized on the carrier, which must be firstly activated. There are carriers made of natural and synthetic polymers: agarose, cellulose, dextran, polyacrylamides, polimethacrylates, as well as silica gel and porous glass. The main task of activation is to prepare the carrierx for the immobilization by the introduction of functional groups interacting with the elements of the antibody. For this purpose, the various activators like soluble and bifunctional crosslinking agents are used. There are many methods of immobilization, which, depending on the antibody-matrix interactions, are divided into physical and chemical immobilization, and depending on the orientation - random and site-directed. During the preparation of immunosorbent one should take into account the characteristics of the matrix, as well as the conditions of the activation and immobilization, which directly affect the efficiency of the bed, and consequently the performance of the chromatographic process.

2

Mikroprzepływowe immunoczujniki z detekcją amperometryczną

Baraniecka A., Górska M., Zaborowski M., Prokaryn P., Szczypiński R., Skwara K., Szmigiel D., Sierakowski A., Nieprzecki M.

Elektronika : konstrukcje, technologie, zastosowania

|

2009

|

Vol. 50, nr 12

100-106

PL

Artykuł obejmuje przekrój zagadnień związanych z mikroprzepływowymi amperometrycznymi immunoczujnikami. Wymienione zostały przykładowe technologie i materiały konstrukcyjne używane do budowy mikroprzepływowych modułów i elektrod oraz immunoenzymatyczne metody analityczne stosowane w immunoczujnikach, takie jak ELISA i ELISPOT. Zostały również przedstawione zagadnienia związane z przepływem w systemach mikroprzepływowych. Opisano technologię matryc z SU-8, struktur mikroprzepływowych wykonanych z PDMS-u oraz laminowanych elektrod Au/Ti na podłożu polimerowym. Uzyskano szczelne mikroprzepływowe układy ze złotymi elektrodami na podłożu z PDMS. Dzięki zastosowaniu trawienia jonowego podłoża przed napyleniem warstw metali oraz zastosowaniu pośredniej warstwy tytanowej, elektrody wykazują dobrą adhezję do podłoża. Dodatkowo została zastosowana warstwa PDMS-u, chroniąca ścieżki metalizacji przed pękaniem, w której plazmowo wytworzono okienka kontaktów elektrycznych i elektrod aktywnych elektrochemicznie. Elektrody charakteryzowały się małą rezystancją elektryczną, choć nie uzyskano zadawalającej powtarzalności ich wykonania. Struktury mikroprzepływowe wraz z elektrodami mogą być zastosowane w amperometrycznym immunoczujniku do pomiaru różnych antygenów, w zależności od użytych immunoreagentów m.in. do pomiaru stężenia fibrynogenu we krwi, w celu określenia ryzyka wystąpienia udaru niedokrwiennego mózgu oraz chorób układu krążenia.

EN

This paper describes some problems related with microfluidic amperometric immunosensors. It contains brief review of technology and constructive materials for microfluidic systems and electrodes. In addition, immunoenzymatic analytical methods like: ELISA and ELISPOT as well as some flow phenomena in microfluidic environment are presented. Polymeric SU-8 masters, PDMS-based microfluidic structures and laminated Au/Ti electrodes on polymeric substrates were fabricated. The microfluidic structures were successfully bonded after oxygen plasma surface activation. Thanks to applying reactive ion etching prior Au sputtering and Ti adhesive layer deposition, the Au/Ti electrodes exhibited a very good adhesion. After patterning, the electrodes were protected by a thin PDMS layer. Openings for electrodes and electrical contact pads were etched by (SF₆ + O₂) plasma. The electrodes had a good electrical conductivity but rather poor reproducibility. The microfluidic structures can be applied in amperometric immunosensor to measure concentration of different antigens e.g. concentration of fibrinogen in blood for evaluation of brain stroke and cardiovascular diseases risk.

3

Wielometryczna cytometria przepływowa jako nowa technika w ręku diagnosty laboratoryjnego - cz. II

Sędek Ł., Mazur B.

Laboratorium - Przegląd Ogólnopolski

|

2007

|

nr 4

40--46

PL

Próbka materiału poddawanego pomiarowi cytometrycznemu musi być odpowiednio przygotowana, w sposób zależny od jej rodzaju oraz od charakteru barwionych antygenów. W prawidłowo przeprowadzonym badaniu nie powinno brakować kontroli, zarówno negatywnej, jak i pozytywnej. Z analizy wyniku można uzyskać jakościowe i ilościowe informacje na temat populacji komórek i ekspresji antygenów. Parametry te są wysoce informatywne w wielu dziedzinach, takich jak hematologia, immunologia, diagnostyka medyczna, a także biofizyka, biochemia czy biologia komórki. Szybki rozwój cytometrii przepływowej w ostatnich latach i rozszerzenie wachlarza jej zastosowania są konsekwencją odkrywania nowych antygenów, barwników fluorescencyjnych i przeciwciał monoklonalnych oraz unowocześniania samych cytometrów.

EN

Flow cytometric assay requires appropriate material preparation, depending on the type of the sample and stained antigens. To determine the level of non-specific antibody binding an additional isotype control sample must be included. Flow cytometric assay produces qualitative data on cell populations and atigen expression, which is highly informative in many fields of science such as hematology, immunology, medical diagnostics, biophysics, biochemistry and cell biology. Rapid development of flow cytometry in recent time, and broadening of its appliacations are a consequence of continuous and successful chase of new antigens, fluorescent dyes, monoclonal antibodies, as well as implementation of modern technologies in fow cytometers

4

Nowa era przeciwciał monoklonalnych

Bednarek I.

Laboratorium - Przegląd Ogólnopolski

|

2006

|

nr 8-9

63--64

PL

Od czasu opracowania techniki fucji komórek tworzenie hybrydom produkujących przeciwciała monoklonalne stało się podstawowym źródłem syntezy wysocespecyficznych cząsteczek immunoglobulin, skierowanych przeciwko wybranemu antygenowi. Przeciwciała monoklonalne wprowadzono zarówno do badań podstawowych, diagnostyki, jak i terapii. Zastosowanie przeciwciał monoklonalnych w terapii wymusiło opracowanie bardziej wyszukanych metod syntezy - zadaniem stało się otrzymanie przeciwciał nie tylko specyficznych, ale maksymalnie zbliżonych strukturą do przeciwciał ludzkich. Tak powstały przeciwciała chimeryczne czy humanizowane, otrzymywane drogą inżynierii genetycznej.

EN

Starting from the day, when cell fusions technique was established, hybridoma cells producing monoclonal antibodies became main source of highly specific immunoglobulin directed against chosen antigen. Recently monoclonal antibodies are introduced into research area, diagnostic and therapy as well. Application of monoclonal antibodies into therapy demands approaching much more sophisicated methods of immunoglobulin synthesis. The aim is synthesis of monoclonal antibodies not only highly specific, but also structurally the closest to the structure of human antibodies. That is how using genetic engineering methods chimeric and humanized monoclonal antibodies were synthesized.