Wyniki wyszukiwania - BazTech

Ograniczanie wyników

1 Chemia Analityczna

1 2009

Znaleziono wyników: 1

Liczba wyników na stronie

Wyniki wyszukiwania

Wyszukiwano:
w słowach kluczowych: direct saponification

Sortuj według:

Ogranicz wyniki do:

Simple HPLC analysis of tocopherols and cholesterol from specimens of animal origin

Czauderna M., Kowalczyk J., Niedźwiedzka K. M.

Chemia Analityczna

2009

Vol. 54, No. 2

203-214

An improved saponification method followed by original isocratic high-performance liquid chromatography (HPLC) with photodiode detection (996 PAD, Waters) and/or fluorescence detection (474 Waters) for simultaneous analysis of cholesterol (CHOL) and δ-, α y-tocopherols (δ-T, α-T and y-T; forms of vitamin E) has been described. The method involved direct saponification of sample solutions flushed with a stream of argon, in the presence of vitamin C, followed by isocratic liquid chromatographic elution (Nova Pak C18column, 4 μm, 300 x 3.9 mm, I.D., Waters) and photodiode detection (UV) at 205 nmand/or fluorescence monitoring (&lambdaex/&lambdaem; = 290/327 nm). Reversed-phase HPLC analyses have revealed that the optimum separation of CHOL and tocopherol from endogenous substances in biological samples can be obtained using the mobile phase containing 17% propan-2-ol and 83% of acetonitrile (v/v) at the flow rate of 1.5 mLmin-1. Applying isocratic elution with UV monitoring at 205 nm and fluorescence detection, 8-T, a-T, y-T and CHOL were eluted after 6.19 š 0.09, 7.01 š 0.08, 7.79 š 0.08 and 14.7 š 0.2 min, respectively.UV detection at 205 nm assured better detector responses for all tocopherols compared to other wavelengths. Detailed investigations have proven that alkaline saponification at 80°C for 15 min followed by isocratic chromatographic elution and UV and fluorescence detection enable simple and satisfactory simultaneous analysis of CHOL and &delta-; α y-tocopherols in specimens of animal origin.

Opisano poprawioną metodę jednoczesnego oznaczania cholesterolu oraz 5-, a- i y-tokoferoli (trzy formy witaminy E). Metoda polega na zmydlaniu próbki i następnie zastosowaniu oryginalnej, izokratycznej, wysokosprawnej chromatografii cieczowej z detekcją wykorzystującą fotodiodę (996 PAD Waters) oraz zdetekcjąfluorescencyjną (474 Waters). Zmydlanie próbki prowadzono w roztworze mieszanym strumieniem argonu w obecności witaminy C. Inne warunki onaczanie: kolumna Nova Pak C18 4 μm, 300 x 3,9 mm I.D., Waters; detekcja w nadfiolecie - 205 nm; fluorescencja:λex/ λem= 290/327 nm. W układzie odwróconych faz najlepsze rozdzielenie otrzymano w przypadku fazy ruchomej o składzie objętościowym: propan-2-ol — 17% i acetonitryl - 83%. Po rozdzieleniu piki δ-, α- i y-tokoferoli oraz chloroform pojawiły się w czasach: 6,19 š 0,09, 7,01 š 0,08, 7,79 š 0,08 and 14,7 š 0,2min. Najlepszą detekcję UV, dla wszystkich tokoferoli, otrzymano przy długości fali 205 nm. Stwierdzono również, że ługowanie alkaliczne w 80°C przez 15 min umożliwia prostą, jednoczesną chromatograficzną analizę tokoferoli w próbkach pochodzenia zwierzęcego.