Wyniki wyszukiwania - BazTech

Ograniczanie wyników

Znaleziono wyników: 2

Liczba wyników na stronie

Wyniki wyszukiwania

Wyszukiwano:
w słowach kluczowych: 3-nitrotyrozyna

Sortuj według:

Ogranicz wyniki do:

Nadtlenoazotyn - silny biologiczny utleniacz

Bijak M., Ponczek M. B., Saluk J., Chabielska M., Stępniak J., Nowak P.

Wiadomości Chemiczne

2012

[Z] 66, 7-8

623-635

As demonstrated in recent years, one of the major factors of oxidative stress, generated in the circulatory system, in both acute and chronic pathological conditions, is peroxynitrite (ONOO –) [4]. Peroxynitrite is a strong biological oxidant and nitrating compound, generated in vivo from a rapid reaction of two relatively less reactive, but commonly found, of free radicals: nitrogen monoxide (NO ) and superoxide (O2–) [8]. This reaction occurs spontaneously and is not catalyzed by any enzyme. A fundamental reaction of ONOO – in biological systems is its fast reaction with carbon dioxide (k = 5,7 ź 104 M–1 s–1) and yields a short-lived intermediate, nitrosoperoxycarbonate (ONOOCO 2 –), which homolyzes leads to the formation of carbonate (CO 3–) and nitrogen dioxide (NO 2) radicals (yield ~35%) [29, 30] (Fig. 1), which are one-electron oxidants. ONOO – is responsible for oxidative modifications in a wide variety of biomolecules and is capable to induce of nitrative changes in sulfur and aromatic amino acids, especially 3-nitrotyrosine and dityrosine formation [17] (Fig. 2). This article describes the formation, reactivity and biological action of peroxynitrite.

Determination of free 3-nitrotyrosine in human plasma using HPLC method with fluorescence detection

Guo S., Shao L., Pei J., Rong L., Wang X., Chi D.

Chemia Analityczna

2009

Vol. 54, No. 4

691-703

High performance liquid chromatography assay for determination of free 3-nitrotyrosine in human plasma was developed. After precipitation of plasma proteins and solid phase extraction of 500 μL-in-volume plasma sample, derivatization reaction between 3-nitrotyrosine and 4-fiuoro-7-nitrobenzofurazon was carried out under alkaline conditions (pH 9.5). A 20μL aliquot of the reaction mixture was injected directly into a HPLC appa ratus using acetonitrile-phosphate buffer (0.02 mol L-1, plus 500 μ L-1TFA, pH 3.0) (36:64, v/v) mobile phase at a flow rate of 1.0 mL min-1. Separation was performed on C18 column at 35°C. Analytical signals were obtained using a fluorescence detector at excitation and emission wavelengths of 470 nm and 530 nm, respectively. Calibration plot was linear over the analyte concentration range in plasma 0.5-50.0 nmol L-1. Limit of detection was 0.15 nmol L-1. Intra- and inter-day variation coefficients were lower than 6.4% and 7.2%, respectively. The proposed method was sensitive, accurate, and reproducible; it allowed for determination of 3-nitrotyrosine in human plasma at a nanomolar level. It was successfully applied to the determination of 3-nitrotyrosine in plasma of healthy volunteers and patients with chronic hepatitis B.

Opracowano metodę analityczną opartą na wysokosprawnej chromatografii do oznaczania wolnej 3-nitrotyrozyny w osoczu ludzkim. Po wytrąceniu białek i ekstrakcji (stała faza) z próbki plazmy o objętości 500 μ L modyfikowano chemicznie 3-nitrotyrozynę w reakcji z 4-fluoro-7-nitrobenzofurazonem przy pH 9,5.2 L końcowego roztworu wstrzykiwano do kolumny z ruchomą fazą o składzie acetonitryl-bufor fosforanowy o pH 3,0 (36:64 v/v) i szybkości przepływu l ,0 mL min-1. Do rozdzielania używano kolumny C18 w temperaturze 35°C. Fluorescencyjny detektor pracował przy długościach fali 471 (wzbudzenie) i 530 nm (emisja). Krzywa kalibrowania była liniowa w zakresie stężeń 0,5-50,0 nmol LL-1. Granica wykrywalności wyniosła 0,15 nmol L-1. Współczynniki zmienności w ciągu dnia i miedzy-dniowe były odpowiednio niższe niż 6,4 i 7,2%. Opracowana metoda jest czuła, dokładna i odtwarzalna; pozwoliła na oznaczenie 3-nitrotyrozyny w osoczu na poziomie nanomolo-wym. Badano poziom tego związku u zdrowych ochotników i pacjentów z chronicznym zapaleniem wątroby.