Wyniki wyszukiwania - BazTech

Ograniczanie wyników

1 Chemia Analityczna

1 2005

Znaleziono wyników: 1

Liczba wyników na stronie

Wyniki wyszukiwania

Sortuj według:

Ogranicz wyniki do:

Quantification of a selenium-containing protein in yeast extract via an accurate determination of a tryptic peptide by species-specific isotope dilution capillary HPLC-ICP MS

Polatajko A., Encinar J. R., Schaumlöffel D., Szpunar J.

Chemia Analityczna

2005

Vol. 50, No. 1

265-278

A method based on the species-specific isotope dilution analysis was developed for the accurate determination of an Asp-Tyr-SeMet-Gly-Ala-A!a-Lys pcptide directly in a tryptic digest of an aqueous extract of selenized yeast. For this purpose a 77Se labeled peptide to be used as a standard had been purified by 2D liquid chromatography from yeast grown on 77SeO3,-rich culture and quantified by reversed-phase isotope dilution analysis. The sample mixed with the 77Se-!abeled peptide spike was analyzed by capillary HPLC-ICP collision cell MS. The isotopic labeling allowed the unequivocal identification of the peptide among all the Se species detected. It compensates for retention time shift and possible peak distortion due to the injection of a complex sail-rich matrix onto a capillary column. The isotoperatio of selenium (77Se80/) was measured in the peak corresponding to the peptide of interest enabling its accurate quantification by isotope dilution. The determined concentration of the peptide, which was quantitatively formed from a selenized 12 kDa heat-shock protein, made the quantification of the latter possible by capillary HPLC-ICP MS directlyin a yeast extract, without any additional purification.

Opracowano specyficzną metodę analizy z zastosowaniem rozcieńczenia izotopowego w celu dokładnego oznaczenia peprydu Asp-Tyr-SeMet-Gly-Ala-Ala-Lys bezpośrednio w wodnym ekstrakcie selenowych drożdży po trawieniu za pomocątrypsyny. W tym celu peptyd znakowany 77Se stosowany jako standard oczyszczano chromatografią cieczową 2D z drożdży hodowanych na kulturze wzbogaconej 77SeO77 i oznaczano ilościowo z zastosowaniem rozcieńczenia izotopowego metodą chromatografii cieczowej w odwróconym układzie faz. Próbkę mieszano z peptydem znaczonym ^Se i analizowano kapilarną chromatografią cieczową i spektrometrią rnas z komorą zderzeniową oraz jonizacją w plazmie indukcyjnie sprzężonej. Izotopowe znakowanie pozwala na jednoznaczną identyfikację peptyclu zawierającego selen. Umożliwia kompensacje przesunięcia czasu retencji i ewentualnego zniekształcenia piku wywołanego wstrzykiwaniem do kapilarnej kolumny matrycy o dużej zawartości soli. Stosunek zawartości izotopów selenu(7777Se(/80Se) mierzono dla piku odpowiadającego peptydowi, co pozwala na dokładne oznaczenie ilościowe me to da rozcieńczenia izotopowego. Oznaczenie stężenia peptydu, utworzonego z selenizowanego białka 12 kDa w szoku term icznym, było możliwe za pomocą kapilarnej HPLCICP MS bez dodatkowego oczyszczania.