W ostatnich latach obserwujemy gwałtowny rozwój diagnostyki laboratoryjnej w kierunku diagnostyki spersonalizowanej. W pracy przedstawiono nowoczesne metody molekularne, ich praktyczne zastosowanie we współczesnej diagnostyce chorób hematologicznych oraz perspektywy wykorzystania tych metod w przyszłości.
EN
In recent years we have observed a rapid development of laboratory diagnostics into personalized diagnostics. The article presents modern molecular methods and their practical application in the contemporary diagnostics of haematological diseases, as well as the prospects of their future clinical use.
Cytometria przepływowa to wysoce specjalistyczna metoda analityczna, umożliwiająca jednoczesny pomiar wielu biochemicznych i biofizycznych, właściwości zawieszonych w cieczy komórek i/lub ich składowych. Technika opiera się na zastosowaniu przeciwciał monoklonalnych sprzężonych z barwnikami fluorescencyjnymi. Pomiar cytometryczny polega na analizie światła rozproszonego przez komórki oraz fluorescencji emitowanej na skutek wzbudzenia barwników. Informuje on o ich wielkości, wewnętrznej złożoności (ziarnistości) oraz ich składzie antygenowym. W skład cytometru przepływowego wchodzi układ ciśnieniowo-cieczowy, optyczny ze źródłem światła (laserem) oraz elektroniczny. Cytometry wyposażone są w przynajmniej jeden laser, emitujący światło o określonej długości fali. Liczba laserów determinuje maksymalną liczbę barwników fluorescencyjnych, jakie mogą być jednocześnie użyte. Podstawą przeprowadzenia adekwatnych pomiarów jest prawidłowa kalibracja aparatu oraz staranna kontrola jakości jego pracy.
EN
Flow cytometry is a highly specific analytical technique enabling simultaneous measurement of many biochemical and biophysical properties of cells or their fragments. The technique is based on application of monoclonal antibodies conjugated with fluorescent dyes. Flow cytometric assay relies on analysis of tight scattered on the cells as well as fluerescences emitted by excited dyes. This gives an idea about cell size, their internal complexity and antigen expression. Flow cytometers consist of three main systems: fluidics, optics with light source (laser) and electrincs. Flow cytometers are equipped in at least one laser emmiting light of particular wave lenght. The number of lasers determines the maximum number of fluorescent dyes to be used at the same time. The key to obtain adequate results is proper calibration and conscientious quality control.
Próbka materiału poddawanego pomiarowi cytometrycznemu musi być odpowiednio przygotowana, w sposób zależny od jej rodzaju oraz od charakteru barwionych antygenów. W prawidłowo przeprowadzonym badaniu nie powinno brakować kontroli, zarówno negatywnej, jak i pozytywnej. Z analizy wyniku można uzyskać jakościowe i ilościowe informacje na temat populacji komórek i ekspresji antygenów. Parametry te są wysoce informatywne w wielu dziedzinach, takich jak hematologia, immunologia, diagnostyka medyczna, a także biofizyka, biochemia czy biologia komórki. Szybki rozwój cytometrii przepływowej w ostatnich latach i rozszerzenie wachlarza jej zastosowania są konsekwencją odkrywania nowych antygenów, barwników fluorescencyjnych i przeciwciał monoklonalnych oraz unowocześniania samych cytometrów.
EN
Flow cytometric assay requires appropriate material preparation, depending on the type of the sample and stained antigens. To determine the level of non-specific antibody binding an additional isotype control sample must be included. Flow cytometric assay produces qualitative data on cell populations and atigen expression, which is highly informative in many fields of science such as hematology, immunology, medical diagnostics, biophysics, biochemistry and cell biology. Rapid development of flow cytometry in recent time, and broadening of its appliacations are a consequence of continuous and successful chase of new antigens, fluorescent dyes, monoclonal antibodies, as well as implementation of modern technologies in fow cytometers
JavaScript jest wyłączony w Twojej przeglądarce internetowej. Włącz go, a następnie odśwież stronę, aby móc w pełni z niej korzystać.