Wyniki wyszukiwania - BazTech

Ograniczanie wyników

1 Chemia Analityczna

1 2001

Znaleziono wyników: 1

Liczba wyników na stronie

Wyniki wyszukiwania

Sortuj według:

Ogranicz wyniki do:

Determination of selected oxycholesterols in human blood plasma by means of thin-layer chromatography with densitometry

Janoszka B., Tyrpień K., Wielkoszyński T., Dobosz C., Bodzek D., Bodzek P., Olejek A.

Chemia Analityczna

2001

Vol. 46, No. 1

11-21

Selected oxycholesterols: 5-cholesten-3|3-ol-7-one, sum of 5-cholestene-3p,7p-diol and 5-choleslene-3p,7a-diol, sum of 5alpha,6alpha-epoxycholestan-3p-ol and 5p,6p-epoxycho-lestan-3p-ol were determined in human blood plasma samples by the use of TLC with densitometry. The plasma was hydrolysed with ethanol solution of KOH and then extraction of lipids with n-hexane was performed. After cleanup of organic phase on silica gel SPE cartridges, oxycholesterols fraction was eluted with 2-propanol in n-hexane. Next, the fraction, after separation by TLC, was quantificated by densitometry. For the determination of 5-cholesten-3beta-ol-7-one and sum of 5-cholestene-3p,7p-diol and -3p,7a-diol the plates coated with silica gel and acetone with chloroform (1:9,v/v) as mobile phase were used. RP-18 stationary phase and 3% 2-propanol in dichloromethane solution was used for the sum of 5beta,6beta- and 5alpha,6alpha-epoxycholestan-3p-ol determination. Quantitation was carried out after Liebermann-Burchard reaction for all oxycholesterols, except 5-choles-ten-3beta-ol-7-one, for which visualization and determination was performed under UV light (X = 239 nm). Recoveries from plasma spiked with known amount of 5-choles -ten-3beta-ol-7-one as well as sensitivity and repeatability of this method were sufficient.

Opracowano procedurę densytometrycznego oznaczania wybranych oksycholesteroli: 5-cholesten-3alfa-ol-7-onu, sumy 5-cholesten-3beta7beta-diolu i 5-cholesten-3p,7a-diolu oraz sumy 5alpha,6alpha-epoxycholestan-3beta-olu i 5beta, 6beta-epoxyxholestan-3beta-olu wyizolowanych z osocza krwi i rozdzielonych techniką TLC. Lipidy ekstrahowano n-heksanem z osocza poddanego wcześniej hydrolizie alkalicznej za pomocą etanolowego roztworu KOH. Frakcje oksycholesteroli wyodrębniono z ekstraktu lipidów techniką SPE stosując kolumienki wypełnione żelem krzemionkowym oraz elucję roztworem 2-propanolu w heksanie. W celu oznaczenia 5-cholesten-3beta-ol-7-onu oraz sumy 5-cholesten-3beta,7p-dioIu i -3beta,7onu-diolu rozdziały TLC prowadzono na płytkach pokrytych żelem krzemionkowym stosując mieszaninę acetonu i chloroformu (9:1, v/v) jako fazę ruchomą. Dla oznaczenia sumy 5beta,6beta- i 5alpha,6alpha-epoxycholestan-3beta-olu rozdział prowadzono w układzie RP-18/2-propanol-dichlorometan (3:97, v/v). Pomiar densytometryczny fiuores-cencji lub reflektancji powstałych produktów reakcji z odczynnikiem Liebermanna-Burcharda był podstawą oznaczeń ilościowych wszystkich badanych oksycholesteroli, za wyjątkiem 5-cholesten-3beta-ol-7-onu, który jako związek wykazujący absorpcję w zakresie UV (Lambda = 239 nm), mógł być oznaczany bezpośrednio po rozwinięciu chromatogramu. Odzysk 5-cholesten-3beta-ol-7-onu dodanego do osocza wynosił 90% a powtarzalność oznaczeń oksycholesteroli w osoczu wynosiła 10-20%.