Determination of free 3-nitrotyrosine in human plasma using HPLC method with fluorescence detection

• Autorzy: Guo S. , Shao L. , Pei J. , Rong L. , Wang X. , Chi D.

Warianty tytułu

PL

Oznaczanie wolnej 3-nitrotyrozyny w osoczu za pomocą HPLC z detekcją fluorescencyjną

• Języki publikacji: EN

Abstrakty

EN

High performance liquid chromatography assay for determination of free 3-nitrotyrosine in human plasma was developed. After precipitation of plasma proteins and solid phase extraction of 500 μL-in-volume plasma sample, derivatization reaction between 3-nitrotyrosine and 4-fiuoro-7-nitrobenzofurazon was carried out under alkaline conditions (pH 9.5). A 20μL aliquot of the reaction mixture was injected directly into a HPLC appa ratus using acetonitrile-phosphate buffer (0.02 mol L^-1, plus 500 μ L^-1TFA, pH 3.0) (36:64, v/v) mobile phase at a flow rate of 1.0 mL min^-1. Separation was performed on C18 column at 35°C. Analytical signals were obtained using a fluorescence detector at excitation and emission wavelengths of 470 nm and 530 nm, respectively. Calibration plot was linear over the analyte concentration range in plasma 0.5-50.0 nmol L^-1. Limit of detection was 0.15 nmol L^-1. Intra- and inter-day variation coefficients were lower than 6.4% and 7.2%, respectively. The proposed method was sensitive, accurate, and reproducible; it allowed for determination of 3-nitrotyrosine in human plasma at a nanomolar level. It was successfully applied to the determination of 3-nitrotyrosine in plasma of healthy volunteers and patients with chronic hepatitis B.

PL

Opracowano metodę analityczną opartą na wysokosprawnej chromatografii do oznaczania wolnej 3-nitrotyrozyny w osoczu ludzkim. Po wytrąceniu białek i ekstrakcji (stała faza) z próbki plazmy o objętości 500 μ L modyfikowano chemicznie 3-nitrotyrozynę w reakcji z 4-fluoro-7-nitrobenzofurazonem przy pH 9,5.2 L końcowego roztworu wstrzykiwano do kolumny z ruchomą fazą o składzie acetonitryl-bufor fosforanowy o pH 3,0 (36:64 v/v) i szybkości przepływu l ,0 mL min^-1. Do rozdzielania używano kolumny C₁₈ w temperaturze 35°C. Fluorescencyjny detektor pracował przy długościach fali 471 (wzbudzenie) i 530 nm (emisja). Krzywa kalibrowania była liniowa w zakresie stężeń 0,5-50,0 nmol LL^-1. Granica wykrywalności wyniosła 0,15 nmol L^-1. Współczynniki zmienności w ciągu dnia i miedzy-dniowe były odpowiednio niższe niż 6,4 i 7,2%. Opracowana metoda jest czuła, dokładna i odtwarzalna; pozwoliła na oznaczenie 3-nitrotyrozyny w osoczu na poziomie nanomolo-wym. Badano poziom tego związku u zdrowych ochotników i pacjentów z chronicznym zapaleniem wątroby.

Słowa kluczowe

EN

3-nitrotyrosine; 4-fluoro-7-nitrobenzofurazan; solid-phase extraction; fluorescence derivatization; human plasma; HPLC

PL

3-nitrotyrozyna; 4-fluoro-7-nitrobenzofurazon; detekcja fluorescencyjna; osocze; HPLC

• Wydawca: Komitet Chemii Analitycznej PAN
• Czasopismo: Chemia Analityczna
• Rocznik: 2009
• Tom: Vol. 54, No. 4
• Strony: 691--703
• Opis fizyczny: Bibliogr. 21 poz.

Twórcy

autor

Guo S.

autor

Shao L.

autor

Pei J.

autor

Rong L.

autor

Wang X.

autor

Chi D.

• Department of Hygiene Analytical Chemistry, School of Public Health, Shandong University, Jinan 250012, P.R. China,

Bibliografia

• 1. Moncada S. and Higgs E.A., Eur. J. Clin. Invest., 21, 361 (1991).
• 2. Herce-Pagliai C., Kotecha S. and Shuker D.E., Nitric Oxide, 2, 324 (1998).
• 3. Yi D., Ingelse B.A., Duncan M.W. and Smythe G.A., J. Am. Soc. Mass Spectrom., 11, 578 (2000).
• 4. Delatour T., Richoz J., Vuichoud J. and Stadler R.H., Chem. Res. Toxicol., 15, 1209 (2002).
• 5. Duncan M.W., Amino Acids, 25, 351 (2003).
• 6. Radi R., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 101, 4003 (2004).
• 7. Ryberg H. and Caidahl K., J. Chromatogr. B, 851, 160 (2007).
• 8. Szabó C., Ischiropoulos H. and Radi R., Nat. Rev. Drug. Discov., 6, 662 (2007).
• 9. Tsikas D. and Caidahl K., J. Chromatogr. B, 814, 1 (2005).
• 10. Fukuyama N., Takebayashi Y., Hida M., Ishida H., Ichimori K. and Nakazawa H., Free Radic. Biol. Med, 22, 771 (1997).
• 11. Shigenaga M.K., Lee H.H., Blount B.C., Christen S., Shigeno E.T., Yip H. and Ames B.N., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 94, 3211 (1997).
• 12. Sodum R.S., Akerkar S.A. and Fiala E.S., Anal. Biochem., 280, 278 (2000).
• 13. Gaut J.P., Byun J., Tran H.D. and Heinecke J.W., Anal. Biochem., 300, 252 (2002).
• 14. Nicholls S.J., Shen Z., Fu X., Levison B.S. and Hazen S.L., Methods Enzymol., 396, 245 (2005).
• 15. Tsikas D., Schwedhelm E., Stutzer F.K., Gutzki F.M., Rode I., Mehls C. and Frölich J.C., J. Chromatogr. B, 784, 77 (2003).
• 16. Söderling A.S., Ryberg H., Gabrielsson A., Lärstad M., Torén K., Niari S. and Caidahl K., J. Mass Spectrom., 38, 1187 (2003).
• 17. Aoyama C., Santa T., Tsunoda M., Fukushima T., Kitada C. and Imai K., Biomed. Chromatogr., 18, 630 (2004).
• 18. Kamisaki Y., Wada K., Nakamoto K., Kishimoto Y., Kitano M. and Itoh T.. J. Chromatogr. B. 685, 343 (1996).
• 19. Zhang W.Z., Lang C. and Kaye D.M., Biomed. Chromatogr., 21, 273 (2007).
• 20. Zhang H., Le Potier I., Smadja C., Zhang J. and Taverna M., Anal. Bioanal. Chem., 386, 1387 (2006).
• 21. Cuzzocrea S., Zingarelli B., Villari D., Caputi A.P. and. Longo G., Life Sci., 63, PL25-PL30 (1998).