RP-HPLC separation of acetic and trifluoroacetic acids using mobile phase with ion interaction reagent and without buffer

• Autorzy: Bielejewska A. , Głód B. K.

Warianty tytułu

PL

Rozdzielanie kwasów octowego i trifluorooctowego metodą RP-HPLC przy użyciu fazy ruchomej z czynnikiem oddziaływującym z jonami i bez buforu

• Języki publikacji: EN

Abstrakty

EN

Ion interaction reagent, OR, is traditionally added to the mobile phase to improve separation and to increase retention of the ions. Buffer is also added to the mobile phase to stabilize dissociation coefficient. However, it was shown that it is possible to use the mobile phase containing small concentration of IIR without buffer. In the present paper it has been proved that the use of high concentration of IIR without buffer is possible. It enabled us to elaborate a simple, rapid and sensitive RP-HPLC IIR method for the determination of acetic and trifluoroacetic acids (AA and TFA) in synthetic peptides. Separation was carried out using a C ₁₈ column and a mobile phase consisting of 4.5 mmol L^-1 tetra-n-butylammonium hydrogen sultatc (TBAHS), as IIR, in a mixture of rnethanol and water (40:60%, v/v). The analyles were determined spectrophotometrically at wavelength of 200 nm. The calibration curves for AA and TFA showed good linearity (the correlation coefficients were better than 0.99 for both compounds) in the concentration range of 2-200 mmol L^{-1 and 1-10 mmol L-1 for AA and TFA, respectively. Limits of detection (defined as a signal-to-noise ratio 3), were approximately 40 ng (0.03 mmol L-1) and 74 ng (0.05 mmol L-1) for AA and TFA, respectively.}

PL

W celu polepszenia rozdzielenia i zwiększenia retencji jonów tradycyjnie stosuje się związki jonowo-asocjacyjne. Czynnik oddziaływujący z jonami stosuje się na ogól jednocześnie z buforem, który stabilizuje stosunek formy zdysocjowanej do niezdysocjowanej analizowanej substancji. Przy zastosowaniu małych stężeń związków jonowo-asocjacyjnych użycie buforu nie zawsze jest konieczne. W prezentowanej pracy przedstawiono możliwość zastosowania dużego stężenia związkówjonowo-asocjacyjnych bez buforu do oznaczania kwasu octowego i trifluorooctowego \v próbkach peptydów syntetycznych. Pomiary prowadzono na fazie CC ₁₈ z zastosowaniem fazy ruchomej o następującym składzie: 4.5 mmol L^-1 wodorosiarczanu tetra-n-butyloamoniowego w mieszaninie mctanol-woda, 40:60 (v/v). Otrzymane wyniki wykazują dobrą liniowość dla badanych kwasów w zakresie stężeń 2—200 mmol L^-1 dla kwasu octowego i l-l0 mmol L^-1 dla kwasu trifluorooctowego. Wykrywalność (zdefiniowana jako trzykrotna wysokość szumów) wynosi dla kwasu octowego 40 ng (co odpowiada stężeniu 0,03 mmol L^-1) i 74 ng (0,05 mmol L^-1) dla kwasu trifluorooctowego.

Słowa kluczowe

EN

RP HPLC; ion interaction reagent; acetic acid; trifluoroacetic acid; peptides

PL

chromatografia cieczowa wysokosprawna; chromatografia w odwróconym układzie faz; czynnik oddziaływujący z jonami; kwas octowy; kwas trifluorooctowy; peptydy

• Wydawca: Komitet Chemii Analitycznej PAN
• Czasopismo: Chemia Analityczna
• Rocznik: 2005
• Tom: Vol. 50, No. 2
• Strony: 387--395
• Opis fizyczny: Bibliogr. 12 poz.

Twórcy

autor

Bielejewska A.

• Pharmaceutical Research Institute, ul. Rydygiera 8, 02-187 Warsaw, Poland
• Institute of Physical Chemistry, ul. Kasprzaka 44/52, 01-224 Warsaw, Poland

autor

Głód B. K.

• Meat and Fat Research Institute, ul. Jubilerska 4, 04-190 Warsaw, Poland

Bibliografia

• 1. Patthy M., J. Chromatogr. A, 660, 17 (1994).
• 2. Liang X., Li S.Z. and Li W.L., Progr. Biochem. Biophys., 26, 75 (1999).
• 3. Dunn B.M. and Pennington M.W., Methods in Molecular Biology 36, Peptide analysis Protocols, Humana Press 1994.
• 4. Głód B. K., Haddad P.R. and Alexander P.W., J. Chromatogr. A, 589, 209 (1992).
• 5. Haddad P.R. and Jackson P.E., Ion Chromatography: Principles and Applications (J. Chromatog. Lib. 46), Elsevier, Amsterdam 1990.
• 6. Rocklin R.D., Pohl C.A. and Schibler J.A., J. Chromatogr., 411 107 (1987).
• 7. Głód B.K., Neurochem. Res., 22, 1237 (1997).
• 8. Kemula W., Głód B.K. and Kutner W., J. Liquid Chromatogr., 6, 1823 (1983).
• 9. Bruzzoniti M.C., Mentasti E. and Sarzanini C., J. Chromatogr. A, 770, 51 (1997).
• 10. Cecctii T., J. Chromatogr. A, 958, 51 (2002).
• 11. Mafé S., Ramirez P., Tanioka A. and Pellier J., J. Phys. Chem. B., 101, 1851 (1997).
• 12. Głód B.K., Alexander RW., Haddad P.R. and Chen Z.L., J. Chromatogr. A, 699, 31 (1995).