Determination of selected oxycholesterols in human blood plasma by means of thin-layer chromatography with densitometry

• Autorzy: Janoszka B. , Tyrpień K. , Wielkoszyński T. , Dobosz C. , Bodzek D. , Bodzek P. , Olejek A.

Warianty tytułu

PL

Densytometryczne oznaczanie wybranych oksycholesteroli w osoczu ludzkiej krwi po ich uprzednim rozdzieleniu za pomocą cienkowarstwowej chromatografii

• Języki publikacji: EN

Abstrakty

EN

Selected oxycholesterols: 5-cholesten-3|3-ol-7-one, sum of 5-cholestene-3p,7p-diol and 5-choleslene-3p,7a-diol, sum of 5alpha,6alpha-epoxycholestan-3p-ol and 5p,6p-epoxycho-lestan-3p-ol were determined in human blood plasma samples by the use of TLC with densitometry. The plasma was hydrolysed with ethanol solution of KOH and then extraction of lipids with n-hexane was performed. After cleanup of organic phase on silica gel SPE cartridges, oxycholesterols fraction was eluted with 2-propanol in n-hexane. Next, the fraction, after separation by TLC, was quantificated by densitometry. For the determination of 5-cholesten-3beta-ol-7-one and sum of 5-cholestene-3p,7p-diol and -3p,7a-diol the plates coated with silica gel and acetone with chloroform (1:9,v/v) as mobile phase were used. RP-18 stationary phase and 3% 2-propanol in dichloromethane solution was used for the sum of 5beta,6beta- and 5alpha,6alpha-epoxycholestan-3p-ol determination. Quantitation was carried out after Liebermann-Burchard reaction for all oxycholesterols, except 5-choles-ten-3beta-ol-7-one, for which visualization and determination was performed under UV light (X = 239 nm). Recoveries from plasma spiked with known amount of 5-choles -ten-3beta-ol-7-one as well as sensitivity and repeatability of this method were sufficient.

PL

Opracowano procedurę densytometrycznego oznaczania wybranych oksycholesteroli: 5-cholesten-3alfa-ol-7-onu, sumy 5-cholesten-3beta7beta-diolu i 5-cholesten-3p,7a-diolu oraz sumy 5alpha,6alpha-epoxycholestan-3beta-olu i 5beta, 6beta-epoxyxholestan-3beta-olu wyizolowanych z osocza krwi i rozdzielonych techniką TLC. Lipidy ekstrahowano n-heksanem z osocza poddanego wcześniej hydrolizie alkalicznej za pomocą etanolowego roztworu KOH. Frakcje oksycholesteroli wyodrębniono z ekstraktu lipidów techniką SPE stosując kolumienki wypełnione żelem krzemionkowym oraz elucję roztworem 2-propanolu w heksanie. W celu oznaczenia 5-cholesten-3beta-ol-7-onu oraz sumy 5-cholesten-3beta,7p-dioIu i -3beta,7onu-diolu rozdziały TLC prowadzono na płytkach pokrytych żelem krzemionkowym stosując mieszaninę acetonu i chloroformu (9:1, v/v) jako fazę ruchomą. Dla oznaczenia sumy 5beta,6beta- i 5alpha,6alpha-epoxycholestan-3beta-olu rozdział prowadzono w układzie RP-18/2-propanol-dichlorometan (3:97, v/v). Pomiar densytometryczny fiuores-cencji lub reflektancji powstałych produktów reakcji z odczynnikiem Liebermanna-Burcharda był podstawą oznaczeń ilościowych wszystkich badanych oksycholesteroli, za wyjątkiem 5-cholesten-3beta-ol-7-onu, który jako związek wykazujący absorpcję w zakresie UV (Lambda = 239 nm), mógł być oznaczany bezpośrednio po rozwinięciu chromatogramu. Odzysk 5-cholesten-3beta-ol-7-onu dodanego do osocza wynosił 90% a powtarzalność oznaczeń oksycholesteroli w osoczu wynosiła 10-20%.

Słowa kluczowe

EN

oxycholesterols; human blood plasma; thin-layer chromatography; densitometry

PL

oksycholesterole; osocze; chromatografia cienkowarstwowa; densytometria

• Wydawca: Komitet Chemii Analitycznej PAN
• Czasopismo: Chemia Analityczna
• Rocznik: 2001
• Tom: Vol. 46, No. 1
• Strony: 11--21
• Opis fizyczny: Bibliogr. 25 poz.

Twórcy

autor

Janoszka B.

• Medical University of Silesia, Faculty of Medicine, Department of Chemistry, 19 Jordana Str., 41-808 Zabrze, Poland

autor

Tyrpień K.

• Medical University of Silesia, Faculty of Medicine, Department of Chemistry, 19 Jordana Str., 41-808 Zabrze, Poland

autor

Wielkoszyński T.

• Medical University of Silesia, Faculty of Medicine, Department of Chemistry, 19 Jordana Str., 41-808 Zabrze, Poland

autor

Dobosz C.

• Medical University of Silesia, Faculty of Medicine, Department of Chemistry, 19 Jordana Str., 41-808 Zabrze, Poland

autor

Bodzek D.

• Medical University of Silesia, Faculty of Medicine, Department of Chemistry, 19 Jordana Str., 41-808 Zabrze, Poland

autor

Bodzek P.

• Medical University of Silesia, Faculty of Medicine, Department of Obstetrics and Gynaecology, 15 Batorego Str., 41-902 Bytom, Poland

autor

Olejek A.

• Medical University of Silesia, Faculty of Medicine, Department of Obstetrics and Gynaecology, 15 Batorego Str., 41-902 Bytom, Poland

Bibliografia

• 1. Smith L.L., Chem. Phys. Lipids, 44, 87 (1997).
• 2. Careri M., Feretti D., Manini P. and Musci M., J. Chromatogr. A, 794, 253 (1998).
• 3. Sevanian A. and Peterson A.R., J. Food Chem. Toxicol., 24, 1103 (1986).
• 4. Peng S.K., Hu B. and Morin R.J., J. Clin. Lab. Anal., 5, 144 (1991).
• 5. Morin R.J., Hu B., Peng S.K. and Sevanian A., J. Clin. Lab. Anal., 5, 219 (1991).
• 6. Hwang P.L., BioEssays, 13, 583 (1991).
• 7. Dzeletovic S., Breuer O., Lund E. and Diczfalusy D., Anal. Biochem., 225, 73 (1995).
• 8. Sevanian A., Seraglia R., Traldi P., Rossato P., Ursini F. and Hodis H., Free Rad. Biol. Med., 17, 397 (1994).
• 9. Nourooz-Zadeh J., J. Agric. Food Chem., 38, 1667 (1990).
• 10. Yoshida T., Honada A., Tanaka N., Matsuzaki Y., Hu B. and Osuga T., J. Chromatogr., 613, 185 (1993).
• 11. Cabori M.F., Costa A., Rodrigues-Estrade M.F. and Lercker G., Chromatographia, 46, 151 (1997).
• 12. Gruenke L.D., Cymerman Craig J., Petrakis N.L. and Lyon M.B., Biomled. & Environ. Mass Spectr., 14, 335 (1987).
• 13. Breuer O., J. Lipid Research, 36, 2275 (1995).
• 14. Schmarr H.G., Gross H.B. and Shibamoto T., J. Agric. Food Chem., 44, 512 (1996).
• 15. Manini P., Andreoli R., Cared M., Elviri L. and Musci M., Rapid Commun. Mass Spectr., 12, 883 (1998).
• 16. Okeyo P., Rentz S.M. and Snow N.H., J. High. Res. Chromatogr., 20, 171 (1997).
• 17. Hoving E.B., J. Chromatogr. B, 671, 341 (1995).
• 18. Jacobson M.S., The Lancet, 19, 656 (1987).
• 19. Bhadra S., Arshad M.A.Q., Rymaszewski Z., Norman E., Wherley R., Subbiah M.T.R., Biochim. & Biophys. Res. Comm., 176, 431 (1991).
• 20. Gray M.F., Lawrie T.D.V. and Brooks C.J.W., Lipids, 6, 836 (1971).
• 21. Finocchiaro E.T., Lee K. and Richardson T., JAOCS, 61, 877 (1984).
• 22. Aringer L. and Eneroth P., J. Lipid. Res., 15, 389 (1994).
• 23. Breuer O., Dzeletovic S., Lund E. and Dicztalusy U., Biochim. & Biophys. Acta, 1302, 145 (1996).
• 24. Regueiro J.A.G. and Maraschiello C., J. Chromatogr. A, 764, 279 (1997).
• 25. Janoszka B., Wielkoszyński T., Tyrpień K., Dobosz C. and Bodzek P., J. Planar Chromatogr., (in press).