Dobór podłóż i sprawdzenie metody wykrywania izolacji bakterii Salmonella w wodach powierzchniowych metodą filtracji membranowej

• Autorzy: Duda A. , Guzy J. , Pytel J. , Rubinkiewicz R.

Warianty tytułu

EN

Selection of the base and verification of salmonella bacteria detection and isolation method in the surface waters using membrane filtration

• Języki publikacji: PL

Abstrakty

PL

W pracy przedstawiono metodykę badawczą wykrywania i izolacji bakterii Salmonella w wodach powierzchniowych metodą filtracji membranowej. Dokonano doboru płynnych pożywek namnażających i selektywnych pożywek agarowych do wykrywania typowych i nietypowych serotypów. Pożywki zostały dobrane tak, aby wyeliminować w znacznym stopniu zaburzenia ze strony towarzyszącej mikroflory podczas procesu wykrywania chorobotwórczych bakterii Salmonella. Opracowana metodyka ma na celu wykrycie zarówno odzwierzęcych serotypów pałeczek Salmonella, jak i S. Typhi, S. Paratyphi. Metodę sprawdzono w konkretnych warunkach laboratoryjnych przeprowadzając pro­ces walidacji obejmujący: wyznaczenie granicy wykrywalności, sprawdzenie poprawność metody za pomocą metod standardowych w porównaniu z testem API 20E (porównanie metody standardowej z metodą alternatywną), podanie prawdopodobieństwa podania wyniku fałszywego. Wykazano, że czynniki selektywne zawarte w pożywkach RVS i MKKTn najlepiej ha­mowały wzrost obfitej flory towarzyszącej w wodach powierzchniowych, a pożywka XLD jest idealnym podłożem do wykrywania typowych bakterii Salmonella spp. Jedyną ze spraw­dzanych pożywek, która umożliwiała wykrycie laktozododatnich Salmonella okazał się agar z siarczynem bizmutu wg Wilson-Blair'a. Metodę sprawdzono i stwierdzono, że jest selek­tywna, specyficzna, powtarzalna i odtwarzalna w warunkach laboratoryjnych. Granica wy­krywalności została określona na poziomie od 1 do 3 jednostek tworzących kolonie.

EN

The article presents the methodology of detection and isolation of Salmonella bacteria in surface waters using membrane filtration. Liquid propagating and selective agar bouillons have been chosen to detect the typical and untypical serotypes. The bullions have been chosen to eliminate the perturbations from accompanying micro flora during process of Salmonella bacteria detection. Formulated methodology should help to detect both epizootie serotypes of Salmonella like S. Typhi, S. Paratyphi. The methodology was verified in the laboratory conditions by validation process covering: determination of detection threshold, comparison with standard methods like API 20E test (comparison of standard method with the alternative one), probability of false result determination. It was showed that selective factors contained in the RVS and MKKTn bullions slowed the growth of rich accompanying flora in the surface waters and XLD bully on is the ideal base for the typical Salmonell ssp. bacteria. The only one of the verified bullions which enabled detection of lactose-positive Salmo­nella bacteria was agar with bismuth sulfite according to Wilson-Blair. The method was verified and it was observed that it is selective and reproducible in the laboratory condi­tions. The detection threshold was established at the level from 1 to 3 of the colony forming units.

Słowa kluczowe

PL

Salmonella; bakterie; wykrywanie; filtracja membranowa

• Wydawca: Oddział SIMP w Lublinie
• Czasopismo: Postępy Nauki i Techniki
• Rocznik: 2009
• Tom: nr 3
• Strony: 30--51
• Opis fizyczny: Bibliogr. 24 poz., rys., tab.

Twórcy

autor

Duda A.

autor

Guzy J.

autor

Pytel J.

autor

Rubinkiewicz R.

• Katedra Podstaw Techniki, Wydział Podstaw Techniki, Politechnika Lubelska, 20-618 Lublin, ul. Nadbystrzycka 38

Bibliografia

• 1. Rozporządzenie Ministra Zdrowia z dnia 27 listopada 2002 roku w sprawie wymagań,ja kim powinny odpowiadać wody powierzchniowe wykorzystywane do zaopatrzenia ludności w wodę przeznaczoną do spożycia. Dz. U. Nr 204 z 2002 r., poz. 1728.
• 2. Rozporządzenie Ministra Zdrowia z dnia 16 października 2002 roku w sprawie wymagań, jakim powinna odpowiadać woda w kąpieliskach. Dz. U. Nr 183 z 2002 r., poz. 1530.
• 3. Kałużewski S., Szych J.: Nowelizacja metodyki wykrywania i identyfikacja pałeczek z rodziny Enterobacteriacć. PZH. Zakład Promocji Zdrowia i Szkolenia Podyplomowego, Warszawa 1999.
• 4. Burbianka M., Pliszka A., Burzycka H.: Mikrobiologia żywności. PZWL, Warszawa 1983.
• 5. Kołożen-Krajewska D.: Wirusy mutanty atakują. Część II. Bezpieczeństwo i higiena żywności. 2/19/2005.
• 6. Smyłła A., Piotrowska-Seget Z., Tyflewska A.: Patogenic bacteria hazard in suface waters. Acta UNC Pr. Limn. 23, 2003.
• 7. Czajkowska D.: Salmonella w żywności jako przyczyna chorób ludzi. Diagnostyka źródłem dobrego zdrowia. Wyd. BioMerieux Polska, 2003.
• 8. Stypułkowska-Misiurewicz H.: Zatrucia pokarmowe Salmonella. Laboratorium Medyczne 5/2004.
• 9. Dohm H., Strzelczyk E.: Żyjące lecz nie dające się hodować bakterie. Post. Microbiol., 43, 3, 2004.
• 10. Pawelec D.P., Jagusztyn-Krynicka E.K.: Atenuowane szczepy Salmonella entericanoniki heterologicznych antygenów. Post. Microbiol., 39, 2000.
• 11. Virella V. G.: Mikrobiologia i choroby zakaźne. Wydawnictwo Medyczne Urban & Partner, Wrocław 2000.
• 12. Zaremba M.L., Baranowski J.: Mikrobiologia Lekarska dla studentów medycyny. Wydawnictwo Lekarskie PZWL, Warszawa 1997.
• 13. Rzędzicki J., Boś M.: Sytuacja epizootyczna patogenów zakażeń pokarmowych (salmonelozy). Wyd. PIWet, Puławy 1998.
• 14. Przybylska A.: Ogniska zbiorowych zatruć i zakażeń pokarmowych o etiologii bakteryjnej w Polsce w latach 1990-1996. Przegląd Epidemiologiczny, 52, 1998.
• 15. Przybylska A.: Zatrucia i zakażenia pokarmowe w 1998. Przegląd Epidemiologiczny, 54, 2000.
• 16. Przybylska A.: Ogniska zbiorowych zatruć i zakażeń pokarmowych w Polsce w latach 1985-1999. Przegląd Epidemiologiczny, 55, 2001.
• 17. Przybylska A.: Zatrucia i zakażenia pokarmowe w 2001. Przegląd Epidemiologiczny, 57, 2003.
• 18. Kowal. A., Świderska-Bróż M.: Oczyszczanie wody. PWN, Warszawa-Wrocław 1996.
• 19. Metodyka wykrywania i izolacji Salmonella z wód powierzchniowych i ścieków. Wydawnictwo Metodyczne Państwowego Zakładu Higieny, Warszawa 2001.
• 20. PN-A-82055:1994. Mięso i przetwory mięsne. Badania mikrobiologiczne. Wykrywanie obecności pałeczek z rodzaju Salmonella.
• 21. PN-EN ISO 6579:2003. Mikrobiologia żywności i pasz. Horyzontalna metoda wykrywania Salmonella spp.
• 22. PN-A-04023:2001. Mikrobiologia żywności. Wykrywanie i identyfikacja drobnoustrojów z Enterobacteriacae.
• 23. PN-EN ISO 16140:2004. Mikrobiologia żywności i pasz. Protokół walidacji metod alternatywnych.
• 24. Pytel J., Rubinkiewicz R.: Metodyka wykrywania i izolacji bakterii Salmonella z wód powierzchniowych. Opracowanie i walidacja. Materiały seminarium Doskonalenie funkcjonowania laboratorium mikrobiologicznego woda, str. 1-15, Gdańsk 2006.