Rapid protein extraction method using ultrasound probe sonication for metal bound protein molecular weight screening in vegetal tissues

• Autorzy: Pedredo Z. , Madrid Y. , Camara C.

Warianty tytułu

PL

Szybka metoda ekstrakcji białek związanych z metalami, a pochodzących z tkanek roślinnych przy użyciu ultradźwięków i pierscieniowm wyznaczaniu ich masy molekularnej

• Języki publikacji: EN

Abstrakty

EN

A fast, reliable and simple protein disruption method for metals (Cu, Ni, Co and Zn) bound protein molecular weight characterization in vegetal tissues is described. The method is based on the application of ultrasound probe sonication (USP) and was compared with the traditional and most widely used, grinding disruption method. The resulting cell lysates were characterized by size exclusion chromatography coupled to UV and inductive coupled plasma mass spectrometry. The most efficient extraction conditions were found to be 20 s sonication time at a frequency of 20 kHz without need of using protease inhibitor. The proposed method was proved to be efficient and fast for the disruption of vegetal tissues and could be considered as an alternative to conventional sample treatment for metal bound protein molecular weight screening and metal speciation studies in vegetal tissues.

PL

Opisano szybką, prostą i wiarygodną metodę degradacji białek zawierających metale Cu, Ni, Co i Zn, a pochodzących z tkanek roślinnych, które scharakteryzowano poprzez pomiar masy molekularnej. W tym celu wykorzystano ultradźwięki (technikę USP) i sposób ten porównano z tradycyjną metodą degradacji poprzez mechaniczne rozcieranie. Lizat komórkowy charakteryzowano za pomocą chromatografii wykluczającej z detekcją UV oraz ICP-MS. Największe wydajności ekstrakcji uzyskiwano przy sonif1kacji w czasie 20 s przy częstotliwości 20 kHz bez dodatku inhibitora proteazy.

Słowa kluczowe

EN

ultrasound probe sonication; SEC; ICP-MS; protein extraction method; vegetal tisuues; speciation

PL

ekstrakcja za pomocą ultradźwięków; SEC; ICP-MS; metody ekstrakcji białek; tkanki roślinne; specjacja

• Wydawca: Towarzystwo Chemii i Inżynierii Ekologicznej
• Czasopismo: Chemia i Inżynieria Ekologiczna
• Rocznik: 2005
• Tom: Vol. 12, nr 5-6
• Strony: 573--586
• Opis fizyczny: Bibliogr. 12 poz., 7 rys., 2 tab.

Twórcy

autor

Pedredo Z.

• Departamento de Quimica Analitica, Facultad de Ciencias Quimicas, Universidad Complutense de Madrid. Ciudad Universitaria s/n, 28040 Madrid, Spain

autor

Madrid Y.

• Departamento de Quimica Analitica, Facultad de Ciencias Quimicas, Universidad Complutense de Madrid. Ciudad Universitaria s/n, 28040 Madrid, Spain

autor

Camara C.

• Departamento de Quimica Analitica, Facultad de Ciencias Quimicas, Universidad Complutense de Madrid. Ciudad Universitaria s/n, 28040 Madrid, Spain

• Departamento de Quimica Analitica, Facultad de Ciencias Quimicas, Universidad Complutense de Madrid. Ciudad Universitaria s/n, 28040 Madrid, Spain

Bibliografia

• [1] Roe S.: [in:] Protein purification techniques: a practical approach. Second Edition. Oxford University Press, 2001.
• [2] Harris E.L.V. and Angal S.: [in:] Protein purification methods: a practical approach. Oxford University Press, 1989.
• [3] Lovitt R.W., Jones M., Collins S.E., Coss G.M., Yau C.P. and Attouch C.: Process Biochem., 2000, 36, 415-421.
• [4] Song D.D. and Jcques N.A.: Anal. Biochem. (Notes & tips) 1997, 248 , 300-301.
• [5] Agrawal P.B. and Pandit A.B.: Biochem. Eng. J., 2003, 15, 37-45.
• [6] Capelo J.L., Ximenez-Embun P.,Madrid-Albarran Y. and Camara C.: Technical Notes. Anal. Chem., 2004, 76, 233-237.
• [7] Cabanero A.I., Madrid Y. and Camara C.: Anal. Bioanal. Chem., 2005, 381, 373-379.
• [8] Sanz E, Munoz-Oliva R and Camara C.: Anal. Chim. Acta, 2005, 535, 227-235.
• [9] Luque-Garcia J.L. and Luque de Castro M.D.: Trends Anal. Chem., 2003, 22, 41-47.
• [10] Viskari P.J and Colyer C.L.: Anal. Biochem., 2003, 319, 263-271.
• [11] Chassaigne H., Vacchina V. and Lobinski R.: Trends Anal. Chem., 2000, 19, 300-313.
• [12] Merian E. Anke M. Ihnat M. and Stoeppler M.: [in:] Elements and their compounds in the environment, vol. 1, 2nd edition, 2004.