Protein homogeneity testing by reversed-phase high-performance liquid chromatography of reduced and non-reduced samples

• Autorzy: Minkiewicz P. , Dziuba J. , Niklewicz M.

Warianty tytułu

PL

Testowanie homogeniczności białek przy użyciu wysokosprawnej chromatografii cieczowej z odwróconymi fazami redukowanych i nieredukowanych próbek

• Języki publikacji: EN

Abstrakty

EN

The concept of this study was based on the assumption that protein standards obtained using the same method may reveal heterogeneity explainable by changes in the disulphide bonding pattern. Two lots of bovine a-lactalbumin standard were subjected to reversed-phase high-performance liquid chromatography (RP-HPLC). One of them was homogenous. The other revealed the presence of two major fractions when non reduced. Neither RP-HPLC after protein reduction nor mass spectrometry showed differences between them. This indicates that one of the lots contained isomers with different locations of disulphide bonds. A comparison of RP-HPLC profiles obtained with and without reduction may be thus recommended as a tool for testing homogeneity of protein standards, especially those used in experiments involving denaturation.

PL

Wzorce białek izolowane tą samą metodą mogą wykazać heterogeniczność. Założono, że brak homogeniczności może być wyjaśniony występującymi różnicami w położeniu wiązań disiarczkowych. Dwie partie bydlęcej laktoalbuminy-a zostały poddane analizie przy pomocy wysokosprawnej chromatografii cieczowej z odwróconymi fazami (RP-HPLC). Jedna z partii była homogeniczna, a druga tworzyła dwie frakcje, jeśli przed analizą nie była zredukowana (rys. 1). Zarówno RP-HPLC jak i spektrometria mas nie wykazały różnicy między próbkami pochodzącymi z różnych partii, ale uprzednio zredukowanymi (rys. 1. i 2.). Wynik ten wskazuje, iż jedna z partii białka zawierała izomery różniące się położeniem wiązań disiarczkowych. Na podstawie niniejszego eksperymentu można polecić porównanie chromatogramów białka niezredukowanego oraz zredukowanego jako test służący badaniu homogeniczności wzorców białek. Test taki byłby szczególnie przydatny w przypadku próbek białek przeznaczonych do badań procesów denaturacji.

Słowa kluczowe

EN

disulphide bonds; a-lactalbumin; protein standard heterogeneity; reversed-phase high-performance liquid chromatography

PL

wiązania disiarczkowe; laktoalbumina-a; heterogeniczność wzorców białek; wysokosprawna chromatografia cieczowa z odwróconymi fazami

• Wydawca: Sieć Badawcza Łukasiewicz – Instytut Chemii Przemysłowej
• Czasopismo: Polimery
• Rocznik: 2005
• Tom: T. 50, nr 5
• Strony: 379--382
• Opis fizyczny: Bibliogr. 21 poz.

Twórcy

autor

Minkiewicz P.

• University of Warmia and Mazury in Olsztyn, Chair of Food Biochemistry, Plac Cieszyński 1, 10-726 Olsztyn Kortowo, Poland

autor

Dziuba J.

• University of Warmia and Mazury in Olsztyn, Chair of Food Biochemistry, Plac Cieszyński 1, 10-726 Olsztyn Kortowo, Poland

autor

Niklewicz M.

• University of Warmia and Mazury in Olsztyn, Chair of Food Biochemistry, Plac Cieszyński 1, 10-726 Olsztyn Kortowo, Poland

Bibliografia

• 1. Dadlez M.: Acta Biochim. Polon. 1997, 44, 433.
• 2. Wedemeyer W. J., Welker E., Narayan M., Scheraga H. A.: Biochemistry 2000, 39, 4207.
• 3. Croguennec T., Bouhallab S., Mollé D., O‘Kennedy B. T., Mehra R.: Biochem. Biophys. Res. Commun. 2003, 301, 465.
• 4. Croguennec T., Mollé D., Mehra A., Bouhallab S.: Protein Sci. 2004, 13, 1340.
• 5. Dutton J. L., Bansal P. S., Hogg R. C., Adams D. J., Alewood P. F., Craik D. J.: J. Biol. Chem. 2002, 277, 48849.
• 6. Chang J.-Y., Bulychev A., Li L.: FEBS Lett. 2000, 487, 298.
• 7. Chang J.-Y., Li L.: J. Biol. Chem. 2001, 276, 9705.
• 8. SWISS-PROT database is available at the website: http://www.expasy.org
• 9. Uversky V. N.: Cell. Mol. Life Sci. 2003, 60, 1852.
• 10. Farrell H. M. Jr, Jimenez-Flores R., Bleck G. T., Brown E. M., Butler J. E., Creamer L. K., Hicks C. L., Hollar C. M., Ng-Kwai-Hang K. F., Swaisgood H. E.: J. Dairy Sci. 2004, 87, 1641.
• 11. de la Fuente M. A., Singh H., Hemar Y.: Trends Food Sci. Technol. 2002, 13, 262.
• 12. Brodbeck U., Denton W. L., Tanahashi N., Ebner K. E.: J. Biol. Chem. 1967, 242, 1391.
• 13. Visser S. , Slangen C. J., Rollema H. S.: J. Chromatogr. 1991, 548, 361.
• 14. Karas M., Hillenkamp F.: Anal. Chem. 1988, 60, 2299.
• 15. Flensburg J., Haid D., Blomberg J., Bielawski J., Ivansson D.: J. Biochem. Biophys. Methods 2004, 60, 319.
• 16. Slangen C. J., Visser S.: J. Agric. Food Chem. 1999, 47, 4549.
• 17. Hau J., Bovetto L.: J. Chromatogr. A 2001, 926, 105.
• 18. Chang J. -Y.: J. Biol. Chem. 1995, 270, 25 661.
• 19. Chang J. -Y.: Anal. Biochem. 1999, 268, 147.
• 20. Singh R. R., Chang J.-Y.: Biochim. Biophys. Acta 2003, 1651, 85.
• 21. Li L., Chang J.-Y.: Protein J. 2004, 23, 3.